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本文介紹幾種常見(jiàn)的微生物基礎(chǔ)試驗(yàn)的目的、原理、內(nèi)容等,以便剛剛接觸微生物的同志們對(duì)試驗(yàn)有個(gè)基本的認(rèn)識(shí).

實(shí)驗(yàn)一常用培養(yǎng)基的制備、滅菌與消毒

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>

1、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟;掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過(guò)濾除菌的操作方法;

2、了解培養(yǎng)基的配制原理;了解常見(jiàn)滅菌、清毒基本原理及方法.

二、實(shí)驗(yàn)原理

培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物.培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水.根據(jù)微生物的種類(lèi)和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?培養(yǎng)基也有不同的種類(lèi)和配制方法.

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基,有時(shí)又稱(chēng)為普通培養(yǎng)基.由于這種培養(yǎng)基中含有一般細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需要的最基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),所以可供微生物生長(zhǎng)繁殖之用.

干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過(guò)升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果.

三、試劑與器材

1、器材試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號(hào)筆、麻繩、紗布、吸管、培養(yǎng)皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過(guò)濾器、鑷子等.

2、試劑牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、稱(chēng)量→溶化→調(diào)pH→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查

2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫?fù)u床→降溫→開(kāi)箱取物

3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查

4、過(guò)濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1、要嚴(yán)格按配方配制.

2、調(diào)pH不要過(guò)頭.

3、干熱滅菌要注意物品不要堆放過(guò)緊,注意溫度的時(shí)間控制,70oC以下放物、取物.

4、高壓滅菌要注意物品不要過(guò)多,加熱后排除冷空氣,到時(shí)降壓回零取物.

5、過(guò)濾除菌要注意各部件滅菌,壓濾時(shí),壓力要適當(dāng),不可太猛太快,濾膜要注意清洗保存.

六、思考題

1、培養(yǎng)基配好后,為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無(wú)菌的？

2、在配制培養(yǎng)基的操作過(guò)程中應(yīng)注意些什么問(wèn)題?為什么？

3、培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應(yīng)具備哪些條件?為什么？

4、培養(yǎng)基的配制原則是什么？

實(shí)驗(yàn)二土壤中微生物分離純化培養(yǎng)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>

1、掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù);掌握微生物培養(yǎng)方法;

2、了解不同的微生物菌落在斜面上、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特征;進(jìn)一步熟練和掌握微生物無(wú)菌操作技術(shù).

二、實(shí)驗(yàn)原理

從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱(chēng)為微生物的分離與純化.

常用的分離、純化方法:單細(xì)胞挑取法,稀釋涂布平板法,稀釋混合平板法,平板劃線(xiàn)法.

稀釋涂布平板法步驟:倒平板－制備土壤污水稀釋液－涂布－培養(yǎng)－挑菌落.

平板劃線(xiàn)法步驟:倒平板－標(biāo)記培養(yǎng)基名稱(chēng)－劃線(xiàn).

三、試劑與器材

1、器材盛9ml無(wú)菌水的試管、盛90ml無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶、無(wú)菌玻璃涂棒、無(wú)菌吸管、接種環(huán)、酒精燈、無(wú)菌培養(yǎng)皿、顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板等.

2、試劑牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,高氏1號(hào)培養(yǎng)基,查氏培養(yǎng)基

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、土壤稀釋液的制備

2、微生物分離純化:稀釋涂平板法,平皿劃線(xiàn)分離法,微生物培養(yǎng)技術(shù)

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1、掌握含菌培養(yǎng)基的配制,嚴(yán)格控制溫度.

2、平板劃線(xiàn)應(yīng)防止染菌,同時(shí)應(yīng)注意劃線(xiàn)深度及密度.

六、思考題

1、如何確定平板上某單個(gè)菌落是否為純培養(yǎng)？請(qǐng)寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)的主要步驟.

2、如果要分離得到極端嗜鹽細(xì)菌,在什么地方取樣品為宜？并說(shuō)明理由.

實(shí)驗(yàn)三菌種保藏

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>

1、學(xué)習(xí)并掌握菌種保藏的基本原理.

2、掌握常用的幾種不同的菌種保藏方法.

二、實(shí)驗(yàn)原理

微生物個(gè)體微小、代謝旺盛、生長(zhǎng)繁殖快,如果保存不妥容易發(fā)生變異和雜菌污染,甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡等現(xiàn)象.因此,保存好菌種是非常必要和重要的.常用的菌種保藏方法包括傳代培養(yǎng)法、載體法、懸液法、冷凍法和真空干燥法

三、試劑與器材

1、材料大腸桿菌、青霉菌、放線(xiàn)菌

2、試劑液體石蠟、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％鹽酸、無(wú)水氯化鈣、食鹽、干冰

3、器材無(wú)菌吸管、無(wú)菌滴管、無(wú)菌培養(yǎng)皿;安額管、凍干管、40目與100目篩子、油紙、濾紙條(0.5X1、2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空壓力表、噴燈、L形五通管、冰箱、低溫冰箱(—30℃)、超低溫冰箱和液氮罐等.

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、斜面保藏法

2、液體石蠟法

3、穿刺保藏法

4、砂土管保藏法

5、冷凍真空干燥保存法

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1、清楚各種保藏方法的優(yōu)缺點(diǎn),針對(duì)不同要求選擇適宜的保藏方法.

2、熔封安瓶時(shí)防止封閉不嚴(yán).

3、液氮凍存操作應(yīng)防止凍傷.

六、思考題

根據(jù)你自己的實(shí)驗(yàn)談?wù)?--2種菌種保藏方法的利弊?

實(shí)驗(yàn)四細(xì)菌形態(tài)觀(guān)察及單染色

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>

1、了解簡(jiǎn)單染色法的原理,并掌握其操作方法.

2、學(xué)習(xí)并掌握微生物涂片、染色的基本技術(shù)和無(wú)菌操作技術(shù).

3、鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法.

4、初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征.

二、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)菌個(gè)體微小,且較透明,必須借助染色法使菌體著色,與背景形成鮮明的對(duì)比,以便在顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察.根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?可分為簡(jiǎn)單染色法、鑒別染色法和特殊染色法等.簡(jiǎn)單染色法是最基本的染色方法,是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色.此法操作簡(jiǎn)便,適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀(guān)察.常用堿性染料進(jìn)行簡(jiǎn)單染色.

三、試劑與器材

1、材料大腸桿菌,枯草芽孢桿菌

2、試劑呂氏堿性美藍(lán)染液(或草酸銨結(jié)晶紫染液)、齊氏石炭酸復(fù)紅染液.

3、器材顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)等.

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

簡(jiǎn)單染色法:涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1、涂片時(shí),生理鹽水及取菌不宜過(guò)多,涂片應(yīng)盡可能均勻,

2、水洗步驟水流不宜過(guò)大,過(guò)急,以免涂片薄膜脫落.

六、思考題

1、你認(rèn)為制備細(xì)菌染色標(biāo)本時(shí),尤其應(yīng)該注意哪些環(huán)幣?

2、為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀(guān)察?

3、如果你的涂片未經(jīng)熱固定,將會(huì)出現(xiàn)什么問(wèn)題?如果加熱溫度過(guò)高、實(shí)驗(yàn)五放線(xiàn)菌及霉菌形態(tài)觀(guān)察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?　　

1、了解放線(xiàn)菌、霉菌形態(tài)觀(guān)察的原理; 　　

2、學(xué)習(xí)并掌握觀(guān)察放線(xiàn)菌、霉菌形態(tài)的操作方法; 　　

3、初步了解放線(xiàn)菌、霉菌的形態(tài)特征.

二、實(shí)驗(yàn)原理　　

放線(xiàn)菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類(lèi)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌.常見(jiàn)放線(xiàn)菌大多能形成菌絲體,緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的叫基內(nèi)菌絲(簡(jiǎn)稱(chēng)“基絲”),基絲生長(zhǎng)到一定階段還能向空氣中生長(zhǎng)出氣生菌絲(簡(jiǎn)稱(chēng)“氣絲”),并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子.有的放線(xiàn)菌只產(chǎn)生基絲而無(wú)氣絲.在顯微鏡下直接觀(guān)察時(shí),氣絲在上層、基絲在下層,氣絲色暗,基絲較透明.孢子絲依種類(lèi)的不同,有直、波曲、各種螺旋形或輪生. 　　

霉菌可產(chǎn)生復(fù)合分枝的菌絲體,分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲,氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲,由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子.霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲) 及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類(lèi)霉菌的重要依據(jù).霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線(xiàn)菌粗得多,常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍,因此,用低倍顯微鏡即可觀(guān)察.人們?cè)O(shè)計(jì)了各種培養(yǎng)和觀(guān)察方法,這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線(xiàn)菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài)特征.本實(shí)驗(yàn)采用插片法. 　　

插片法:將放線(xiàn)菌接種在瓊脂平板上,插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng),使放線(xiàn)菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長(zhǎng)而附著在蓋玻上.觀(guān)察時(shí),輕輕取出蓋玻片,置于載玻片上直接鏡檢.這種方法可觀(guān)察到放線(xiàn)菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的特征,而且便于觀(guān)察不同生長(zhǎng)期的形態(tài).

三、試劑與器材　　

1、材料黑曲霉、青霉和根霉,細(xì)黃鏈霉菌或青色鏈霉菌,滅菌的高氏I號(hào)瓊脂和滅菌的查氏培養(yǎng)基. 　　

2、實(shí)驗(yàn)器材經(jīng)滅菌的:平皿、玻璃紙、無(wú)菌吸管、蓋玻片、玻璃涂棒,以及載玻片、接種環(huán)、接種鏟、鑷子、顯微鏡等.

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容　　

倒平板→接種→插片→培養(yǎng)→鏡檢

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng) 　　

1、倒平板要厚一些,接種時(shí)劃線(xiàn)要密. 　　

2、插片時(shí)要有一定角度并與劃線(xiàn)垂直. 　　

3、觀(guān)察時(shí),宜用略暗光線(xiàn);先用低倍鏡找到適當(dāng)視野,更換高倍鏡觀(guān)察. 　　

4、如果用0、1%美藍(lán)對(duì)培養(yǎng)后的蓋玻片進(jìn)行染色后觀(guān)察,效果會(huì)更好.

六、思考題　　

1、鏡檢時(shí),你如何區(qū)分放線(xiàn)菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲？　　

2、你認(rèn)為霉菌和放線(xiàn)菌菌絲的主要區(qū)別是什么？

實(shí)驗(yàn)六革蘭氏染色及芽孢染色

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>

1、了解革蘭氏染色法和芽孢染色法的原理,并掌握其操作方法;

2、了解革蘭氏染色法在細(xì)菌分類(lèi)鑒定中的重要性;

3、學(xué)習(xí)并掌握微生物涂片、染色的基本技術(shù)和無(wú)菌操作技術(shù);

4、學(xué)習(xí)顯微鏡(油鏡)的使用方法;

5、初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征.

二、實(shí)驗(yàn)原理

革蘭氏染色法的基本步驟是:先用初染劑結(jié)晶紫進(jìn)行染色,再用碘液媒染,然后用乙醇(或丙酮)脫色,最后用復(fù)染劑(如番紅)復(fù)染.經(jīng)此方法染色后,細(xì)胞保留初染劑藍(lán)紫色的細(xì)菌為革蘭氏陽(yáng)性菌;如果細(xì)胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細(xì)菌染上復(fù)染劑的顏色(紅色),該菌屬于革蘭氏陰性菌.革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌重要的鑒別特征,為保證染色結(jié)果的正確性,采用規(guī)范的染色方法是十分必要的.芽孢染色法的基本原理,用著色力強(qiáng)的染色劑孔雀綠或石炭酸復(fù)紅,在加熱條件下染色,使染料不僅進(jìn)入菌體也可進(jìn)入芽孢內(nèi),進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色,而芽孢一經(jīng)著色難以被水洗脫,當(dāng)用對(duì)比度大的復(fù)染劑染色后,芽孢仍保留初染劑的顏色,而菌體和芽孢囊被染成復(fù)染劑的顏色,使芽孢和菌體更易于區(qū)分.

三、試劑與器材

1、材料:枯草芽孢桿菌12～18h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物,大腸桿菌約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物

2、試劑革蘭氏染色液(結(jié)晶紫液、碘液、95％乙醇、番紅液).5％孔雀綠水溶液

3、實(shí)驗(yàn)器材小試管、滴管、燒杯、試管架、濾紙、木夾子、載玻片、蓋玻片、凹載玻片、無(wú)菌水、顯微鏡等、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)、擦鏡紙、生理鹽水等.

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、革蘭氏染色法制片→初染→媒染→脫色→復(fù)染→鏡檢.

2、Schaefer-Fulton氏染色法制片→染色→水洗→復(fù)染→水洗→鏡檢.

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1、涂片時(shí),生理鹽水及取菌不宜過(guò)多,涂片應(yīng)盡可能均勻,

2、乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié),嚴(yán)格掌握脫色時(shí)間.

六、思考題

1、你認(rèn)為要得到正確的改良的革蘭氏染色結(jié)果必須注意哪些操作？關(guān)鍵在哪一步？為什么？

2、現(xiàn)有一株細(xì)菌寬度明顯大于大腸桿菌的粗壯桿菌,請(qǐng)你鑒定其革蘭氏染色反應(yīng).你怎樣運(yùn)用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌株進(jìn)行涂片染色,以證明你的染色結(jié)果正確性.

3、你的染色結(jié)果是否正確？如果不正確,請(qǐng)說(shuō)明原因.

4、若涂片中觀(guān)察到的只是大量游離芽孢,很少看到芽孢囊及營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,你認(rèn)為這是什么原因？

5、說(shuō)明芽孢染色法的原理.用簡(jiǎn)單染色法能否觀(guān)察到細(xì)菌的芽孢？

實(shí)驗(yàn)七酵母菌的形態(tài)觀(guān)察及死活細(xì)胞的鑒定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>

1、觀(guān)察酵母菌的形態(tài)特征、出芽生殖方式,并掌握酵母菌與細(xì)菌形態(tài)特征的區(qū)別.

2、學(xué)習(xí)鑒別死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法.

二、實(shí)驗(yàn)原理

酵母菌是單細(xì)胞的真核微生物,菌體比細(xì)菌大而且不運(yùn)動(dòng).酵母菌的繁殖方式分為無(wú)性繁殖和有性繁殖兩種,以無(wú)性繁殖為主.芽殖是酵母菌普遍的無(wú)性繁殖方式,少數(shù)為裂殖;有性繁殖是產(chǎn)生子囊和子囊孢子.本實(shí)驗(yàn)是通過(guò)美藍(lán)染液水浸片和水一碘液水浸片來(lái)觀(guān)察酵母的形態(tài)和芽殖方式.

美藍(lán)是一種無(wú)毒性的染料,它的氧化型呈藍(lán)色,還原型無(wú)色.用美藍(lán)對(duì)酵母活細(xì)胞染色時(shí),由于細(xì)胞的新陳代謝作用,細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力,能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o(wú)色的還原型,而對(duì)代謝作用微弱或死細(xì)胞,無(wú)此還原能力或還原能力極弱,而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色.因此,不僅用此法可觀(guān)察酵母細(xì)胞形態(tài),也可用來(lái)鑒別酵母菌的死細(xì)胞和活細(xì)胞.

三、試劑與器材

1、材料釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡爾酵母(Saccharomyces calsbergensis)培養(yǎng)2天左右的麥芽汁(或豆芽汁)液體培養(yǎng)物.

2、試劑 0.05％和O.1％呂氏堿性美藍(lán)染色液、革蘭氏染色用的碘液.

3、器材顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、灑精燈等.

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、美藍(lán)浸片觀(guān)察酵母培養(yǎng)→制片→染色→鏡檢→30分鐘后再鏡檢

2、水-碘浸片觀(guān)察

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1、染液不宜過(guò)多或過(guò)少,否則,在蓋上蓋玻片時(shí),菌液溢出或出現(xiàn)大量氣泡.

2、用鑷子取一塊蓋玻片,先將一側(cè)與菌液接觸,然后慢慢將蓋玻片放下,使其蓋在菌液上,蓋玻片不宜平著放下,避免氣泡產(chǎn)生.

六、思考題

1、呂氏堿性美藍(lán)染液濃度和作用時(shí)間的不同,對(duì)酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響？試分析其原因.

2、在顯微鏡下,酵母菌有哪些突出的特征區(qū)別于一般細(xì)菌？

實(shí)驗(yàn)八微生物直接計(jì)數(shù)法及測(cè)微技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>

1、了解血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)原理,并掌握計(jì)數(shù)方法.

2、掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物大小的方法.

二、實(shí)驗(yàn)原理

顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將一定稀釋的菌體或孢子懸液注入血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室中,于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀(guān)的方法.因?yàn)橛?jì)數(shù)板是一塊特別的載玻片.其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái);中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半,每一邊的平臺(tái)上各刻有一個(gè)方格網(wǎng),每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格,一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格,而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格(見(jiàn)圖2—3—44);另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格,每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格,無(wú)論哪種每個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè).每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為0.1mm,所以計(jì)數(shù)室的容積為0.1mm³.計(jì)數(shù)時(shí),通常只用5個(gè)中格內(nèi)的菌體(孢子)數(shù)即可.然后求出每個(gè)中方格的平均值,再乘上25或16,得出一個(gè)大方格中的總茵數(shù),再換算成lml菌液中的總菌數(shù).若設(shè)5個(gè)中方格中總菌數(shù)為N,菌液稀釋倍數(shù)為M,如果是25個(gè)中方格計(jì)數(shù)板,則計(jì)算方法為:

　　　　lml菌液中的總菌數(shù)=平均每個(gè)中格中菌的個(gè)數(shù)×25×104×M=50000N•M(個(gè))

微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征,也是分類(lèi)鑒定的依據(jù)之一.微生物大小的測(cè)定,需要在顯微鏡下,借助于特殊的測(cè)量工具——測(cè)微尺,包括目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺.鏡臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻有精確等分線(xiàn)的載玻片,一般是將1mm等分為100格,每格長(zhǎng)0.01mm(即10pm).鏡臺(tái)測(cè)微尺并不直接用來(lái)測(cè)量細(xì)胞的大小,而是用于校正目鏡測(cè)微尺每格的相對(duì)長(zhǎng)度.

三、試劑與器材

1、材料釀酒酵母、藤黃微球菌和大腸桿菌的染色標(biāo)本片、釀酒酵母24h馬鈴薯斜面培養(yǎng)物.

2、實(shí)驗(yàn)器材細(xì)胞計(jì)數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、無(wú)菌毛細(xì)滴管、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等.

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、微生物直接計(jì)數(shù)法菌懸液制備→鏡檢計(jì)數(shù)室→加樣品→顯微鏡計(jì)數(shù)→清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

2、微生物測(cè)微技術(shù) 裝目鏡測(cè)微尺→校正→菌體大小測(cè)定

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1、防止加樣空氣泡產(chǎn)生.

2、調(diào)節(jié)顯微鏡光線(xiàn)的強(qiáng)弱適當(dāng).

六、思考題

1、根據(jù)你的體會(huì),說(shuō)明用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來(lái)自哪些方面？應(yīng)如何盡量減少誤差、力求準(zhǔn)確？

2、某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率,請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)1～2種可行的檢測(cè)方法.

3、為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí),必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行校正？

編輯：songjiajie2010

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